ELISA試劑盒的溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃等。37℃是試驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體結合的適宜溫度。在樹立ELISA方法作反響動力學研究時，試驗標明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經1～2小時，產品的生成可達高峰。為加快反響，可進步反響的溫度，有些試驗在43℃進行，但不宜選用更高的溫度。但因所需時刻太長，在ELISA試劑盒中一般不予選用。
ELISA試劑盒實踐進程操作技巧：
1）加樣器應筆直參加標本，防止刮擦包被板底部，加樣進程中防止液體外濺，血清殘留在反響孔壁上。
2）加樣器吸頭要清洗干凈，防止污染，加樣次第要與說明書共同，否則可導致成果過錯，試驗重復性差。
3）在進行試驗前應對試驗的物理參數有充沛的了解，如環境溫度、反響孵育溫度和孵育時刻、洗刷的次數等，要先檢查水育箱溫度，ELISA試劑盒是否符合要求。
4）顯色液量不行過多，加樣的工作環境不能處于陽光直射的環境下，加顯色體系后要避光反響，顯色液量不能過多，防止顯色過強。
5）要確保加液量共同，在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量禁絕，造成顯色不一致，判別過錯。
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